Гостиница Ярвил
Выделение дегидрогеназы начинают с экстракции фермента буферным раствором. За этим следует умеренное нагревание для осаждения белков и других компонентов смеси, легче подвергающихся денатурации, чем выделяемая дегидрогеназа. Большую часть фермента (а также другие вещества с близкой растворимостью) осаждают ацетоном; при этом отделяются многие низкомолекулярные соединения, экстрагирующиеся вместе с белком. Последующее растворение и повторное осаждение сульфатом аммония приводят к получению препарата с большей удельной ферментативной активностью. Такой способ очистки, однако, сопровождается потерей некоторого количества фермента на каждой операции (см. таблицу в примере 11.1).
Дальнейшую очистку для отделения дегидрогеназы от других белков с близкой растворимостью выполняют путем последовательного суспендирования осадка, полученного на стадии 8 (пример 11.1), во все менее и менее концентрированных растворах сульфата аммония. Поскольку растворимость белков возрастает при снижении концентрации соли до величин, значительно уступающих концентрации насыщенного раствора, то таким путем удается очистить фермент от все более и более близких белков
<< назад вперед >>