Гостиница Ярвил
Полученная в результате ряда таких операций супернатантная жидкость имеет удельную активность (ферментативную активность отнесенную к общему количеству растворенных белков), которая примерно в 100 раз превышает удельную активность исходного продукта экстракции буферным раствором. Кроме того, в этих операциях отделяется большая часть примесей небелковой природы.
Пример 11.1. Последовательность операций при выделении ферментов из биомассы (алкогольдегидрогеназы из сухих пекарских дрожжей).
1. Измельчить дрожжи в шаровой мельнице.
2. Смешать 100 г мелкоизмельченных сухих дрожжей со 100 мл 0,066 М
динатрийфосфатного буфера, содержащего 0,001 М этилендиаминтетра-уксусной кислоты (EDTA).
3. Добавить 200 мл буферного раствора, перемешивать 2 ч при 37 °С и оставить на 3 ч при комнатной температуре.
4. Отделить дрожжевую биомассу центрифугированием (28 000 g, 20 мин) (определить ферментативную активность).
5. Отделить термически неустойчивые белки нагреванием при —55°С в течение 15 мин (алкогольдегидрогеназа относительно устойчива) (определить ферментативную активность).
6. К прошедшему
<< назад вперед >>