Гостиница Ярвил
тепловую обработку раствору добавить ацетон из расчета 50 мл ацетона на 100 мл раствора (смешивание производить при температуре от —2 до —4°С), осадок отбросить. Добавить еще 55 мл ацетона, центрифугировать при 28 000 g и супернатант отбросить (определить ферментативную активность).
7. Осадок суспендировать повторно в 50 мл 10_3 М фосфатного буфера (рН 7,5), содержащего 10-3 М EDTA, дважды диализовать против 3 л свежего фосфатного буфера в течение 1 ч.
8. При 0 °С постепенно добавить сульфат аммония (36 г на 100 мл диализованного раствора) и центрифугировать при этой же температуре (определить ферментативную активность).
9. Полученный на предыдущей стадии осадок суспендировать в 30 мл разбавленного вдвое насыщенного раствора (NH4)2S04. Осадок отделить от супернатанта и провести повторное осаждение последовательно растворами сульфата аммония, концентрация которых составляет 45, 40, 35 и 25% от насыщенного раствора (определить ферментативную активность).
10. Объединить высокоактивные супернатанты и добавить насыщенный раствор сульфата аммония до помутнения. Оставить на несколько суток при 0 °С для кристаллизации. Растворить осадок и перекристаллизовать из 10 мл 10_3 М EDTA (определить ферментативную активность).
<< назад вперед >>